一、服務簡介

      CRISPR(clustered,regularly interspaced,short palindromic repeats)是一種來自細菌降解入侵的病毒DNA或其他外源DNA的免疫機制。在細菌及古細菌中，CRISPR系統共分成3類，其中Ⅰ類和Ⅲ類需要多種CRISPR相關蛋白（Cas蛋白）共同發揮作用，而Ⅱ類系統只需要一種Cas蛋白即可，這為其能夠廣泛應用提供了便利條件。目前，來自Streptococcus pyogenes的CRISPR/Cas9系統應用較為廣泛。

      Cas9蛋白（含有兩個核酸酶結構域，可以分別切割DNA兩條單鏈）。Cas9首先與crRNA及tracrRNA結合成復合物，然后通過PAM序列結合并侵入DNA，形成RNA-DNA復合結構，進而對目的DNA雙鏈進行切割，使DNA雙鏈斷裂。由于PAM序列結構簡單（5’-NGG-3’），幾乎可以在所有的基因中都能找到大量靶點，因此得到廣泛的應用。CRISPR/Cas9技術已經成功應用于植物、細菌、酵母、魚類及哺乳動物細胞，是目前較高效的基因組編輯技術。

二、技術流程

    1、針對敲除目的基因設計合適靶點；

    2、構建 cas9-gRNA表達質粒并測序驗證；

    3、目的細胞培養，并將構建好的表達質粒轉染細胞；

    4、抗性篩選獲得單克隆細胞；

    5、基因敲除細胞系的檢測

三、服務說明

   1、細胞株必須是單核貼壁細胞，可以穩定傳代；

   2、敲除目的基因后，細胞不至死；

   3、此活動針對的是定制單基因敲除細胞系。

四、 詢價及訂購

感謝您選擇我公司的Crispr/Cas9服務。如有相關問題請聯系我們的工作人員。